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PCR 和 qPCR 有什么區(qū)別？

來源： | 發(fā)布日期：2023-12-13 | 瀏覽量：1

PCR 和 qPCR 都是用于擴(kuò)增 DNA 特定片段的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)。兩者之間的主要區(qū)別在于 qPCR 是實(shí)時(shí)方法，而PCR 不是。

這意味著通過 qPCR，您可以實(shí)時(shí)監(jiān)控目標(biāo) DNA 的擴(kuò)增情況。本指南將向您介紹這兩種方法并解釋它們之間的主要區(qū)別。

什么是PCR？

PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是一種實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，由 Kary Mullis 在 20 世紀(jì) 80 年代開發(fā)，如今用于從少量 DNA 產(chǎn)生大量 DNA。

PCR 通常是其他過程中使用的步驟，例如 DNA 測(cè)序、病原體檢測(cè)和凝膠電泳。PCR是一種重要的診斷技術(shù)，常用于病毒學(xué)、微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、真菌學(xué)和牙科等領(lǐng)域。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR) 是一種用于制備 DNA 特定片段的多個(gè)副本的方法。這個(gè)過程從少量模板 DNA 開始，然后通過稱為聚合酶的酶進(jìn)行復(fù)制。通過重復(fù)加熱和冷卻循環(huán)可以增加復(fù)制的數(shù)量，這會(huì)分離 DNA 鏈，以便它們可以再次復(fù)制。

PCR 的最終產(chǎn)物是目標(biāo) DNA 序列的大量相同副本。然后該產(chǎn)品可用于進(jìn)一步分析，例如測(cè)序或 Southern 印跡。 PCR 還可用于從 mRNA 模板分子制備 cDNA。

什么是 qPCR（實(shí)時(shí) PCR）？

定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qPCR 或定量 PCR）與 PCR 非常相似，但它還允許您量化樣品中存在的目標(biāo) DNA 的量。qPCR 涉及在擴(kuò)增過程中添加與目標(biāo) DNA 結(jié)合的熒光染料或探針。當(dāng)這些探針被激光激發(fā)時(shí)，它們會(huì)發(fā)出不同波長的光。

通過測(cè)量每個(gè)波長發(fā)出的光，您可以確定在擴(kuò)增開始之前樣品中存在多少目標(biāo) DNA。qPCR 還可用于通過測(cè)量熒光隨時(shí)間的增加來實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增進(jìn)度。

什么是逆轉(zhuǎn)錄PCR？

逆轉(zhuǎn)錄 PCR (RT-PCR) 是一種 PCR，用于從 mRNA 模板分子制備 cDNA。RT-PCR 通常用于檢測(cè)和定量 RNA 病毒，例如 HIV 和丙型肝炎。

要進(jìn)行 RT-PCR，您首先需要使用逆轉(zhuǎn)錄酶將 mRNA 模板逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA。然后您可以使用 PCR 來擴(kuò)增您的目標(biāo) cDNA 序列。 RT-PCR 是一種非常靈敏的方法，可用于檢測(cè)樣品中極低水平的 RNA 病毒。

qPCR 具有測(cè)量基因表達(dá)的能力。在基因表達(dá)中，當(dāng)讀取一段 DNA 時(shí)，就會(huì)合成 mRNA，然后使用 mRNA 來生產(chǎn)蛋白質(zhì)。

在逆轉(zhuǎn)錄過程中，逆轉(zhuǎn)錄酶可用于創(chuàng)建互補(bǔ) DNA (cDNA)，這將是所研究的 RNA 的副本。然后對(duì) cDNA 進(jìn)行 qPCR，以準(zhǔn)確測(cè)量產(chǎn)生的量。

RNA 可用于 PCR 和 qPCR，如果 RNA 用于 PCR，則稱為 RT-PCR，如果 RNA 用于 qPCR，則稱為 qRT-PCR。

PCR 和 qPCR 之間的差異

PCR 和 qPCR 之間的主要區(qū)別在于 qPCR 是實(shí)時(shí)方法，而 PCR 不是。這意味著通過 qPCR，您可以實(shí)時(shí)監(jiān)控目標(biāo) DNA 的擴(kuò)增情況。

兩種方法之間的另一個(gè)區(qū)別是 qPCR 需要使用熒光染料或探針，而 PCR 則不需要。這些探針可讓您定量樣品中存在的目標(biāo) DNA 的量。

PCR 通常用于擴(kuò)增 DNA 以進(jìn)行測(cè)序或其他下游應(yīng)用。
qPCR 通常用于檢測(cè)和定量 RNA 病毒。
RT-PCR 是 PCR 的一種，用于從 mRNA 模板分子制備 cDNA。

PCR 和 qPCR 的應(yīng)用和用途

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

PCR 是一個(gè)相對(duì)簡(jiǎn)單的過程，可以檢測(cè)DNA 是否存在。PCR 應(yīng)用于許多不同的領(lǐng)域，包括法醫(yī)學(xué)、醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)。它經(jīng)常用于擴(kuò)增小片段 DNA 以進(jìn)行測(cè)序或其他下游應(yīng)用。

PCR 還可用于從 mRNA 模板分子制備 cDNA。

定量PCR

qPCR 提供測(cè)量反應(yīng)速率的實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)，提供有關(guān)任何給定時(shí)間樣本中存在的 DNA 數(shù)量的信息，本質(zhì)上，它能夠測(cè)量基因表達(dá)速率。

在分子生物學(xué)中，這有助于理解蛋白質(zhì)合成，從而有助于理解健康和疾病的生物途徑。實(shí)時(shí)或 qPCR 可用于檢測(cè)基因表達(dá)、病原體和 RNA 的存在和數(shù)量，以及驗(yàn)證 DNA 微陣列結(jié)果和環(huán)境應(yīng)用。

qPCR 具有高通量和更寬的動(dòng)態(tài)范圍的優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)樗梢栽谕豢變?nèi)檢測(cè)廣泛的表達(dá)水平。由于其多重功能，可以在同一實(shí)驗(yàn)中擴(kuò)增多個(gè)目標(biāo)、高通量和快速結(jié)果，因此運(yùn)行起來更加經(jīng)濟(jì)。