流式細(xì)胞術(shù)是基礎(chǔ)研究以及藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)中細(xì)胞分析和基于細(xì)胞的測(cè)定的強(qiáng)大工具。 該技術(shù)的應(yīng)用多種多樣，從簡(jiǎn)單的細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力測(cè)定，到復(fù)雜的細(xì)胞內(nèi)染色。 但正是分析大量轉(zhuǎn)錄后v變化的能力，使得流式細(xì)胞術(shù)成為現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室不可或缺的一部分。
盡管流式細(xì)胞術(shù)首次出現(xiàn)于 20 世紀(jì) 60 年代，并且此后取得了無(wú)數(shù)的進(jìn)步，但它仍然被譽(yù)為一項(xiàng)困難的技術(shù)，需要具有深入知識(shí)的專業(yè)專家才能成功執(zhí)行。 iQue  ? 先進(jìn)的流式細(xì)胞術(shù)平臺(tái)的開發(fā)旨在克服這一問(wèn)題，使這種強(qiáng)大的技術(shù)重新回到每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的能力范圍內(nèi)。

本案例研究滿足現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)工作流程的需求，探索實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的以下四個(gè)關(guān)鍵支柱，以展示加速基于細(xì)胞的檢測(cè)工作流程的綜合解決方案將帶來(lái)的好處。

1. 重現(xiàn)性
2. 可靠性
3. 優(yōu)化樣品使用
4. 多重分析

iQue  ?  3 是一種先進(jìn)的高通量流式細(xì)胞術(shù)解決方案，旨在加快整個(gè)工作流程。 iQue  ? 平臺(tái)提供了一種新穎的篩選解決方案，簡(jiǎn)化了從實(shí)驗(yàn)設(shè)置和采集到分析和結(jié)果的過(guò)程。

專為藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)而設(shè)計(jì)，得益于一系列標(biāo)準(zhǔn)化方案和試劑，它需要最少的分析優(yōu)化，并且系統(tǒng)的專用 iQue Forecyt  ? 軟件可實(shí)時(shí)生成 IC50/EC50 曲線、熱圖和圖表分析等數(shù)據(jù)時(shí)間。 快速、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)生成對(duì)于項(xiàng)目進(jìn)展至關(guān)重要，因此 iQue  ? 旨在通過(guò)使用更少材料的更少實(shí)驗(yàn)提供更深入的生物學(xué)見(jiàn)解。 它可以同時(shí)測(cè)量細(xì)胞特異性參數(shù)（例如表型變化和增殖率），并在單次測(cè)定中量化分泌因子，每孔體積低至 5 μL。

重現(xiàn)性
iQue  ? 經(jīng)過(guò)精心設(shè)計(jì)，可在重復(fù)過(guò)程中生成可靠的數(shù)據(jù)，顯示測(cè)定板之間良好的日內(nèi)和日間相關(guān)性（圖 1A 和 1B）。
含有已知量試劑的孔用于測(cè)試不同板重復(fù)和測(cè)試天數(shù)的再現(xiàn)性。 將四種小鼠抗體同種型 IgG1、IgG2a、IgG2b 和 IgG3 以多種濃度混合，并在 24 個(gè)重復(fù)孔中進(jìn)行測(cè)量。

使用 iQue ? 小鼠 IgG 類型和滴度測(cè)定試劑盒 在同一天運(yùn)行三個(gè)板（圖 1A）或在不同的日子測(cè)量單個(gè)板（圖 1B） 。 對(duì)所有樣品的變異性進(jìn)行了分析，相關(guān)性 R2 > 0.99，線性回歸曲線值約為 1，顯示出日內(nèi)和日間測(cè)試的出色測(cè)定重現(xiàn)性。

優(yōu)化樣品使用
iQue? 的順序采樣和小型化功能允許隨著時(shí)間的推移從單個(gè)孔中評(píng)估多個(gè)參數(shù)，從而節(jié)省寶貴的樣品和試劑，并減少實(shí)驗(yàn)變異性。 為了證明這一點(diǎn)，iQue  ? 多重人抗體內(nèi)化試劑盒（一種抗體內(nèi)化測(cè)定）運(yùn)行 20 小時(shí)，重復(fù)評(píng)估多個(gè)參數(shù)，包括細(xì)胞活力。 Ramos 細(xì)胞以 1×106 個(gè)細(xì)胞/mL 的密度接種在含有兩倍連續(xù)稀釋抗體的 384 孔板中（從 1 mg/mL 開始），并在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)每個(gè)孔進(jìn)行連續(xù)測(cè)量。 熱圖（圖 4A）和圖表（圖 4B）提供了每個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)抗體內(nèi)化程度的數(shù)據(jù)分析，證明了評(píng)估多個(gè)時(shí)間點(diǎn)以檢測(cè)內(nèi)化速率較慢的抗體的重要性，如 CD20 所示。 使用 iQue  ?重復(fù)采樣 也非常適合跟蹤隨時(shí)間變化的動(dòng)態(tài)生物變化，例如細(xì)胞激活后細(xì)胞因子分泌的量化。

可靠性
iQue  ? 能夠?yàn)橛脩籼峁┛绮煌瑑x器或操作員的一致數(shù)據(jù)，在使用固定光電倍增管 (PMT) 電壓的運(yùn)行之間提供可靠的操作和顯著的一致性。

多重分析
藥物發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室的需求不斷增長(zhǎng)的最后一個(gè)支柱是 iQue  ? 執(zhí)行多參數(shù)測(cè)量以生成更多生物學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)的能力。 憑借經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的、即用型多重檢測(cè)試劑盒，iQue  ? 非常適合處理多個(gè)板并提供多個(gè)讀數(shù)，無(wú)需清洗 |  單次洗滌測(cè)定和新穎的數(shù)據(jù)縮減工具可提供準(zhǔn)確且精確的結(jié)果，同時(shí)緩解實(shí)驗(yàn)室工作流程中的瓶頸。
iQue  ? 可以同時(shí)測(cè)量細(xì)胞表型、增殖和凋亡的變化，并結(jié)合分泌蛋白的釋放（例如細(xì)胞因子），為高內(nèi)涵分析帶來(lái)新的意義。

本案例研究中提供的示例證明了 iQue  ? 作為高內(nèi)涵、高通量細(xì)胞分析的可靠平臺(tái)的適用性。 該系統(tǒng)的開發(fā)考慮了藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)實(shí)驗(yàn)室的需求，其中快速、可重復(fù)和多重篩選平臺(tái)的需求不斷增長(zhǎng)。
總之，無(wú)論您是發(fā)現(xiàn)新的治療性抗體、開發(fā)特定的檢查點(diǎn)抑制劑還是評(píng)估 CAR T 細(xì)胞功能，推動(dòng)您的研究前進(jìn)都取決于以生物學(xué)相關(guān)、可重復(fù)且具有成本效益的方式快速評(píng)估更多樣本的能力。
iQue?  _ 3 是最先進(jìn)的流式細(xì)胞術(shù)平臺(tái)，注重從設(shè)置到采集和分析的速度。 它能夠讓您在創(chuàng)紀(jì)錄的時(shí)間內(nèi)從樣品到可操作的結(jié)果。 iQue  ?  3 結(jié)合了專利采樣方法，可實(shí)現(xiàn)業(yè)內(nèi)最快的樣品采集，能夠處理 96孔板、384孔板 或 1536 孔板，并通過(guò)與任何自動(dòng)化系統(tǒng)連接實(shí)現(xiàn)連續(xù)板裝載。
它是簡(jiǎn)單、可擴(kuò)展的多用戶環(huán)境，具有傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀所不具備的無(wú)人值守自動(dòng)化、全面的分析和可視化工具。